饲料中水分的测定方法

1、适用范围：本标准适用于测定配合饲料和单一饲料中水分含量，但用作饲料的奶制品，动物和植物油脂，矿物质除外。

2、原理: 试样在105±2℃烘箱内，在大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为水分

3、仪器设备

实验室用样品粉碎机或研钵。

分样筛：孔径0.45毫米（40目）

分析天秤：感量0.0001克。

电热式恒温烘箱：可控制温度为105±2℃。

称样皿：玻璃或铝质，直径40毫米以上，高25毫米以下。

干燥器：用氯化钙（干燥试剂）或变色硅胶作干燥剂。

4、试样的选取和制备

选取有代表性的试样，其原始样量应在1000g以上用四分法将原始样品缩减至500g，风干后粉碎至40目，再用四分法缩至200g，装入密封容器，放阴凉干燥处保存。如试样是多汁的鲜样，或无法粉碎时应预先干燥处理，称取试样200~300g，在105℃烘箱中烘15分钟，立即降至65℃，烘干5~6小时，取出后，在室内空气中冷却4小时，称重，即得风干试样。

5、测定步骤

洁净称样皿，在105±2℃烘箱中烘1小时，取出在干燥器中冷却30分钟，称准至0.0002克，再烘干30分钟，同样冷却，称重，直至两次重量之差小于0.0005克为恒重。

用已恒重称样皿称取两份平行样，每份2~5克含水量0.1克以上，样品厚度4毫米以下，准确至0.0002克，不盖称样皿盖，在105±2℃烘箱中烘烘3小时，以温度到达105℃开始计时，取出盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30分钟，称重。

再同样烘干1小时，冷却，称重，直至两次称重之重量差小于0.002克。

测定结果的计算

计算公式：水分（%）=（W1—W2）/（W1—W0）×100

式中：W1—105℃烘干前的试样及称样皿的重量，g；

W2—105℃烘干后试样及称样皿的重量，g；

W0—已恒重的称样皿的重量，g。

重复性

每个试样，应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，两个平行样测定值相差不得超过0.2%，否则重做。

6、注意事项

1）如果试样进行过预先干燥处理，应按下式计算原来试样的所含水分总量：

原试样总水分（%）=预干燥减重（%）+[100—预干燥减重（%）] ×风干试样水分（%）

2）某些含脂肪高的样品，烘干时间长反而增重，乃脂肪氧化所致，应以增重前那次重量为准。

3）含糖分高的易分解或易焦化试样，应使用减压干燥法（70℃，600mm汞柱以下，烘干5小时）测定水份。

试样经灼烧完全后，余下的残留物质（如氧化物和盐）称为灰分。灰分有水溶性与水不溶性，酸溶性、酸不溶性。水溶性灰分大部分是钾、钠、钙、镁等氧化物和可溶性盐，水不溶性灰分除泥沙外，还有铁、铝等的氧化物和碱土金属的碱式磷酸盐。酸不溶性灰分大部分为污染掺入的泥沙和原来存在于动植物组织中经灼烧成的二氧化硅。

5.1 测定原理

饲料中灰分的测定一般采用灰化法。将试样在550℃烧灼，使构成饲料有机物的主要元素C、N、H、等氧化，所余残渣即饲料中所含各种矿物元素的氧化物、氯化物及碳酸盐，以及混杂在饲料中粘土、砂粒等，称为粗灰分。

5.2 仪器设备

样品粉碎机，分析天平（感量0.0001g），电炉，坩埚钳，马福炉，瓷坩埚(50ml)，干燥器（变色硅胶作干燥剂）、40目分样筛。

5.3 试剂及配制：0.5%氯化铁墨水溶液（称0.5g氯化铁溶于100ml蓝墨水中）

5.4 测定步骤

5.4.1 将带盖坩埚洗净烘干后，用钢笔蘸0.5%氯化铁墨水溶液编号。

5.4.2 将坩埚和盖一起放入马福炉，在550℃±20℃下灼烧30min，称重再重复灼烧，冷却、称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重量。

5.4.3 在已知重量的坩埚中称取2g左右试样（不超过坩埚容量的一半，灰分重量应在0.05g以上），在电炉上低温碳化至无烟为止。

5.4.4 炭化后将坩埚移入马福炉中，于550℃下灼烧3h，使全部样品变成灰白色或红棕色（含有锰）。待灰化结束后，待炉温降至200℃下时打开炉门，将坩埚取出于空气中冷却1min.，放入干燥器中冷却30min，称重。再同样灼烧1h，冷却，称重，直至两次重量之差小于0.001g 为恒重量。

5.5 结果计算

5.5.1 计算公式：

粗灰分=(W2-W0)/(W1-W0)*100%

式中：W0为已恒重量空坩埚重（g）；W1为坩埚加试样重（g）；W0为灰化后坩埚加灰分重(g)。

5.5.2 重复性：每个试样应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

粗灰分含量在10%以上，允许相对偏差为0.5%；粗灰分含量在5-10%以上，允许相对偏差为1%；粗灰分含量在5%以下，允许相对偏差为5%。

5.6 注意事项

5.6.1 样品开始炭化时，应打开部分坩埚盖，便于气流流通；温度应逐渐上升，防止火力过大而使部分样品颗粒被逸出的气体带走。

5.6.2 为了避免样品氧化不足，不应把样品磨得太细，压得过紧，样品应松松地放在坩埚内。

5.6.3 灼烧温度不宜超过600℃，否则会引起磷、硫等盐的挥发。

5.6.4 灼烧残渣颜色与试样中各元素含量有关，含铁高时为红棕色，含锰高为淡蓝色。但有明显黑色炭粒时，为炭化不完全，应延长灼烧时间。

饲料中纯蛋白质（真蛋白）的测定

一、测定原理

饲料蛋白质经沸水提取并在碱性溶液中被硫酸铜沉淀。过滤和洗涤后，可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离，再用凯氏定氮法测定沉淀物中的蛋白质含量。

二、仪器设备

（1）烧杯：200ml

（2）定型滤纸

（3）其他设备与粗蛋白质测定法相同

三、试剂与配制

（1）100g.L-1硫酸铜溶液；分析纯硫酸铜（5水硫酸铜）10g溶于100ml水中

（2）25g.L-1氢氧化钠溶液：将2.5g分析纯氢氧化钠溶于100ml水中

（3）10g.L-1氯化钡溶液：1g氯化钡溶于100ml水中

（4）2mol.L盐酸溶液

（5）其他试剂与粗蛋白质测定法相同

四、测定步骤

准确称取试样1g左右（精确至0.0001g）置于200ml烧杯中，加50ml水中，加热至沸。

加入20ml硫酸铜溶液，20ml氢氧化钠溶液，用玻璃棒充分搅拌，放置1h以上。用定性滤纸过滤，然后用60~80摄氏度热水洗涤沉淀5或6次，用氯化钡溶液5滴和盐酸溶液1滴检查滤纸，直至不生成白色硫酸钡沉淀为止。将沉淀和滤纸放在65摄氏度烘箱干燥2h，然后全部转移到凯氏烧瓶中，按半微量凯氏定氮法进行氮的测定。

本标准参照采用国际标准ISO 6490/2－1983《动物饲料——钙含量测定——原子吸收分光光度法》。

　　1　主题内容与适用范围

　　本标准规定了用原子吸收分光光度法和滴定法测定食品中钙。

　　本标准适用于各种食品中钙的测定。

　　第一篇　原子吸收分光光度法

　　2　原理

　　样品经湿消化后，导进原子吸收分光光度计中，经火焰原子化后，吸收422.7nm的共振线，其吸收量与含量成正比，与标准系列比较定量。

　　3　试剂

　　要求使用往离子水，优级纯试剂。

　　3.1　盐酸(GB 622)。

　　3.2　硝酸(GB 626)。

　　3.3　高氯酸(GB 623)。

　　3.4　混合酸消化液：硝酸与高氯酸比为4∶1。

　　3.5　0.5N硝酸溶液：量取45mL硝酸，加往离子水并稀释至1000mL。

　　3.6　2%氧化镧溶液：称取25g氧化镧(纯度大于99.99%)，加75mL盐酸于1000mL容量瓶中，加往离子水稀释至刻度。

　　3.7　钙标准溶液：精确称取1.2486g碳酸钙(纯度大于99.99%)，加50mL往离子水，加盐酸溶解，移进1000mL容量瓶中，加2%氧化镧稀释至刻度。贮存于聚乙烯瓶内，4℃保存。此溶液每毫升相当于500μg钙。

　　3.8　钙标准使用液：钙标准使用液的配制见表1。

　　表1　钙标准使用液配制

　　钙标准使用液配制后，贮存于聚乙烯瓶内，4℃保存。

　　4　仪器与设备

　　所用玻璃仪器均以硫酸－重铬酸钾洗液浸泡数小时，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反复冲洗，最后用往离子水冲洗晒干或烘干，方可使用。

　　4.1　实验室常用设备。

　　4.2　原子吸收分光光度计。

　　5　操纵步骤

　　5.1　样品处理

　　5.1.1　样品制备

　　微量元素分析的样品制备过程中应特别留意防止各种污染。所用设备如电磨、绞肉机、匀浆器、打坏机等必须是不锈钢制品。所用容器必须使用玻璃或聚乙烯制品，做钙测定的样品不得用石磨研碎。湿样(如蔬菜、水果、鲜鱼、鲜肉等)用水冲洗干净后，要用往离子水充分洗净。干粉类样品(如面粉、奶粉等)取样后立即装容器密封保存，防止空气中的灰尘和水分污染。

　　5.1.2　样品消化

　　精确称取均匀样品干样0.5～1.5g(湿样2.0～4.0g，饮料等液体样品5.0～10.0g)于250mL高型烧杯，加混合酸消化液20～30mL，上盖表皿。置于电热板或电沙浴上加热消化。如未消化好而酸液过少时，再补加几毫升混合酸消化液，继续加热消化，直至无色透明为止。加几毫升往离子水，加热以除往多余的硝酸。待烧杯中的液体接近2～3mL时，取下冷却。用往离子水洗并转移于10mL刻度试管中，加往离子水定容至刻度(测钙时用2%氧化镧溶液稀释定容)。

　　取与消化样品相同量的混合酸消化液，按上述操纵做试剂空缺试验测定。

　　5.2　测定

　　将钙、标准使用液分别配制不同浓度系列的标准稀释液，见表2，测定操纵参数见表3。

　　表2　不同浓度系列标准稀释液的配制方法

　　（图略）

　　表3　测定操纵参数

　　（图略）

　　其他实验条件：仪器狭缝、空气及乙快的流量、灯头高度、元素灯电流等均按使用的仪器说明调至最佳状态。

　　将消化好的样液、试剂空缺液和各元素的标准浓度系列分别导进火焰进行测定。

　　5.3　计算

　　5.3.1　标准曲线法

　　以各浓度系列标准溶液与对应的吸光度绘制标准曲线。钙标准曲线如图1所示。它的线性相关系数为0.9996。

　　（图略）

　　测定用样品液及试剂空缺液由标准曲线查出浓度值(c及c0，再按式(1)计算。

　　式中：X——样品中元素的含量，同mg/100g；

　　c——测定用样品中元素的浓度(由标准曲线查出)，μg/mL；

　　c0——试剂空缺液中元素的浓度(由标准曲线查出)，μg/mL；

　　V——样品定容体积，mL；

　　f——稀释倍数；

　　m——样品质量，g；

　　（图略）

　　5.3.2　回回方程法

　　由各元素标准稀释液浓度与对应的吸光度计算出回回方程(也可以输进计算器得出回回方程)，计算见式(2)。

　　c＝ay＋b……………………………………………(2)

　　式中：c——测定用样品中元素的浓度(可由计算器直接得出，μg/mL)；

　　a——曲线斜率；

　　y——元素的吸收度；

　　b——曲线的截距。

　　由回回方程或计算器得出测定样液及试剂空缺液的浓度后，再由式(3)计算。

　　式中各字母的含义同曲线法说明。

　　5.3.3　结果的重复性

　　同实验室平行测定或连续两次测定结果的重现性钙小于10%。

　　最低检测限：钙0.1μg。

　　第二篇　滴定法(EDTA法)

　　6　原理

　　钙与氨羧络合剂能定量地形成金属络合物，其稳定性较钙与指示剂所形成的络合物为强。在适当的pH值范围内，以氨羧络合剂EDTA滴定，在达到当量点时，EDTA就自指示剂络合物中夺取钙离子，使溶液呈现游离指示剂的颜色(终点)。根据EDTA络合剂用量，可计算钙的含量。

　　7　试剂

　　要求使用往离子水，优级纯试剂。

　　7.1　1.25mol/L氢氧化钾溶液：精确称取71.13g氢氧化钾，用往离子水稀释至1000mL。

　　7.2　1%氰化钠溶液：称取1.0g氰化钠，用往离子水稀释至100mL。

　　7.3　0.05mol/L柠檬酸钠溶液：称取14.7g柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)，用往离子水稀释至1000mL。

　　7.4　混合酸消化液：硝酸(GB 626)与高氯酸(GB 623)比为4∶1。

　　7.5　EDTA溶液：精确称取4.50g EDTA(乙二胺四乙酸二钠)，用往离子水稀释至1000mL，贮存于聚乙烯瓶中，4℃保存。使用时稀释10倍即可。

　　7.6　钙标准溶液：精确称取0.1248g碳酸钙(纯度大于99.99%，105～110℃烘干2h)，加20mL往离子水及3mL 0.5mol/L盐酸溶解，移进500mL容量瓶中，加往离子水稀释至刻度，贮存于聚乙烯瓶中，4℃保存。此溶液每毫升相当于100μg钙。

　　7.7　钙红指示剂：称取0.1g钙红指示剂(C21O7N2SH14)，用往离子水稀释至100mL，溶解后即可使用。贮存干冰箱中可保持一个半月以上。

　　8　仪器与设备

　　所有玻璃仪器均以硫酸－重铬酸钾洗液浸泡数小时，再用洗衣粉充分洗刷，后用水反复冲洗，最后用往离子水冲洗晒干或烘干，方可使用。

　　8.1　实验室常用玻璃仪器：高型烧杯(250mL)，微量滴定管(1或2mL)，碱式滴定管(50mL)，刻度吸管(0.5～1mL)，试管等。

　　8.2　电热板：1000～3000W，消化样品用。

　　9　样品制备

　　同第一篇。

　　10　操纵步骤

　　10.1　样品消化

　　同第一篇。

　　10.2　测定

　　10.2.1　标定EDTA浓度

　　吸取0.5mL钙标准溶液，以EDTA滴定，标定其EDTA的浓度，根据滴定结果计算出每毫升EDTA相当于钙的毫克数，即滴定度(T)。

　　10.2.2　样品及空缺滴定

　　吸取0.1～0.5mL(根据钙的含量而定)样品消化液及空缺于试管中，加1滴氰化钠溶液和0.1mL柠檬酸钠溶液，用滴定管加1.5mL 1.25mol/L氢氧化钾溶液，加3滴钙红指示剂，立即以稀释10倍EDTA溶液滴定，至指示剂由紫红色变蓝为止。

　　10.3　计算

　　样品中该元素的含量按式(4)计算：

　　式中：X——样品中元素含量，mg/100g；

　　T——EDTA滴定度，mg/mL；

　　V——滴定样品时所用EDTA量，mL；

　　V0——滴定空缺时所用EDTA量，mL；

　　f——样品稀释倍数；

　　m——样品称重量，g。

　　11　结果的重复性

　　同实验室平行测定或连续两次测定结果的重复性小于10%。

　　本方法的检测范围：5～50μg。